一、 儀器介紹（shào）

實驗目（mù）的：

本試驗用於檢測受試（shì）物對體外培養的（de）哺乳動物細胞的基因突變作用,包（bāo）括堿基對突變、移碼突（tū）變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能（néng）性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和（hé）不加入（rù）代（dài）謝活化係統（tǒng）的條件（jiàn）下（xià）,使細胞暴露於受試物一定（dìng）時間,然後將細胞傳代培養。胸苷激（jī）酶水（shuǐ）平正常的細胞對三（sān）氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因（yīn）而在（zài）培養液中不能生長（zhǎng）分（fèn）裂,突（tū）變（biàn）細胞則不敏感,在含有三（sān）氟（fú）胸苷的選擇性培養液中能繼續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常（cháng）的（de）細胞對 6-硫代鳥嘌（piào）呤（lìng）（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則（zé）不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌呤的選擇性培養液中可生長（zhǎng）形成（chéng）集落。基於突變集落（luò）數,計算突（tū）變頻率（lǜ）以評價（jià）受試物的致突變性。

應用範（fàn）圍

應用於科研、農（nóng）業、衛（wèi）生（shēng）、教育、霧（wù）霾狀態可吸入顆粒染毒效（xiào）果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記（jì）毒理（lǐ）學試驗方法第20部分（fèn）:體外哺（bǔ）乳動物細胞基因突（tū）變試驗》

二、試驗流程

1）細胞（bāo）培養:

選擇合適細胞係（如L5178Y、CHO），常規（guī）傳代培養

2）受試物處理:

暴露於不（bú）同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達期（qī）:

預留足夠時間（通常7-10天）使（shǐ）突變表型顯現。

4.）突變體篩選:

TK試驗（yàn）:使用三氟胸苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成（chéng）分析:

計數突變集落，計算突變頻率（突變集（jí）落數/存活細胞數）

6）數據統計:

與對照組比較，判斷（duàn）突變率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細胞活（huó）力控製:受試物濃度需保證細胞存（cún）活（huó）率（通常>50%）

2）代謝活化係統:需加入S9混合物(模擬（nǐ）體內代謝，（如Aroclor 1254誘導的大（dà）鼠肝（gān）S9）。

3）假陽性/陰性:避（bì）免pH、滲透壓等（děng）非特（tè）異性因素幹擾。

4）合規性:   遵循國（guó）際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：