一、 儀器介紹（shào）

實（shí）驗目的：

本試驗檢測受試物是（shì）否引起培養的哺乳動（dòng）物細胞染色體畸變,以（yǐ）評價受試（shì）物致突變的可能（néng）性

實驗概述：

在加入和不加入（rù）代（dài）謝活化係統的條（tiáo）件下,使培（péi）養的哺乳動物細胞暴露於受試物（wù）中。用中期分裂相阻斷劑（如（rú）秋水仙素或秋（qiū）水仙胺）處（chù）理,使細胞停止在中期（qī）分裂相,隨後收（shōu）獲細胞,製片,染色,分析染色體畸（jī）變。

大部分的致突變劑（jì）導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生（shēng）。雖（suī）然多（duō）倍體的增加可（kě）能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法並不適合用於測定染色體的數目畸變。

應用範（fàn）圍

應用於科研（yán）、農業、衛生、教育（yù）、霧霾狀態可吸入顆（kē）粒染毒效果研（yán）究等各（gè）個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染（rǎn）色體

畸變試（shì）驗》

二、試驗流程

1）細胞（bāo）培養

選擇合（hé）適細胞係，在含血清（qīng）培（péi）養基中培養（yǎng）至對數生長期（qī）。

2）受試物處理

設（shè）置多個濃度組（需包括細（xì）胞（bāo）毒性評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘變劑）

陰性對照（zhào）（溶劑對照）

3.）代謝活化係統（S9混合液）

模擬體（tǐ）內代謝（xiè），用於檢測需代謝激活的致突變（biàn）物（如加Aroclor 1254誘（yòu）導的大鼠肝S9）

4.）采樣時間

短期處理:1個細（xì）胞周期（通常24小時，含或不含S9）

長期處（chù）理:覆蓋多個（gè）細胞（bāo）周期（如48小（xiǎo）時）

5）染色體製備

秋（qiū）水（shuǐ）仙素（或秋水仙胺）處理（lǐ）:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋（cù）酸=3:1）後滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀（yí）器與試劑

關鍵儀器：

培養箱（xiāng）、生物安全櫃、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析係統）

染色體自動掃描儀（yí）（可選（xuǎn））

主要試劑:

細胞培養（yǎng）基、胎牛血清、胰蛋（dàn）白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。