一、 儀（yí）器介紹

實（shí）驗目的：

確定重複接觸受試物對哺乳（rǔ）動物是否可引起皮膚變態反應及（jí）其程度

試驗概述：  

局部封閉塗皮（pí）試驗（Buehler test，BT）和豚（tún）鼠最大值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實（shí）驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導接觸）或皮內注射（shè）受試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發劑量（liàng）的受試物,觀察實驗動物,並與（yǔ）對照動物比較對激發接觸受試物的皮膚（fū）反應強度。

小鼠局部淋巴結分析試驗（yàn）（locallymph node assay，LLNA）是（shì）通過耳部（bù）給予實驗動物受試物,引起（qǐ）淋巴結的淋巴（bā）細胞增生,淋（lín）巴細胞增生與受試（shì）物（wù）劑量（過敏程度）成比例。利（lì）用放射性標記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,並進行對比,獲（huò）得刺激指數,評價致敏強度。

應用範圍

應用於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀（zhuàng）態可（kě）吸入顆粒染毒效果研究（jiū）等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學試驗方（fāng）法第9部分皮膚變態反應（致敏）試驗》

二（èr）、試驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作步（bù）驟:

誘導階段:通過封（fēng）閉式皮膚塗抹受試物（wù），持續10-14天。激發階段:間隔後再次塗抹受（shòu）試（shì）物，觀察皮膚反應。

觀察指（zhǐ）標:紅斑、水腫等皮膚炎症反應的強度(主觀評分（fèn）)

優點:

模擬（nǐ）人類（lèi）皮膚（fū）接觸途徑，適用於局部（bù）製劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操（cāo）作相對溫和。0

缺點:

敏感性較低，可能漏檢（jiǎn）弱致敏物，。依賴主觀評（píng）分（fèn），存在（zài）實（shí）驗者偏（piān）差。0應用場景:傳統化妝（zhuāng）品（pǐn）、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠最（zuì）大值（zhí）試驗（GPMT）

動物（wù）模（mó）型:豚鼠

操作步驟:

誘導階段:皮內注（zhù）射（shè）受試物（常聯合弗氏完全（quán）佐劑）結合皮膚塗抹（mò），持續10-14天。

激發階段:再次塗抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指（zhǐ）標:與BT類似，但反應更（gèng）強烈(紅斑、水腫、硬結)

優點（diǎn）:

敏感性高，可檢測強致敏物和弱致敏物;

國（guó）際公認的“金標準”，尤其適用於化學品和工業原料。

缺點:

使用佐劑可能引發過度免疫反應，導致假陽性;

動物痛苦程度較高，倫理爭議較大。

應用場景:工業化（huà）學品、強致敏性物質(如染發劑、橡膠（jiāo）添加劑)的嚴格檢測。

3.小鼠局（jú）部（bù）淋巴結試（shì）驗（LLNA）

動物模型:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連續3天（tiān）耳部塗抹受試物。

檢測指標:通（tōng）過3H-胸苷或BrdU標記（jì）增殖的（de）淋巴（bā）細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋（lín）巴細胞增殖程度（SI>3判為陽（yáng）性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤差；

符合3R原則:動物用量少，無（wú）需激發階段，痛苦小;

高效快速:試（shì）驗周期短(約1周)。

缺點:

對某些物（wù）質（zhì）(如金屬鹽)敏感（gǎn）性不足，需使用放射（shè）性物質或特殊設備，成本較高。

應用場景:歐盟等法（fǎ）規優先推薦的替（tì）代方法，廣泛用於藥（yào）品、化妝品及化工產（chǎn）品的初篩。